多肽標記和修飾  三羊開肽生物能夠提供數百種多肽的修飾和標記,詳情詢問銷售人員
FITC
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Rhodamine B
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FITC Conjugated Peptides
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FITC-Peptides Under Microscopy
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Rhodamine in 3d model
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Rhodamine B in solution
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到目前為止,具有非常多的多肽標記及修飾的內容,它在多肽藥物,多肽生物學,多肽抗體以及多肽試劑的研究中得到了廣泛的應用。非放射性核素標記(C13,H2,N15),熒光標記(FAM,FITC等),生物素標記,磷酸化修飾等都是目前比較常用的多肽標記和修飾的內容。
1. 非放射性核素標記
目前在非放射性核素標記中,使用廣泛的仍然是C13,H2,因為其使用安全,放射性小。現在有比較完全的非放射性標記的氨基酸,可以按照正常的多肽合成方法將標記好的氨基酸直接連接到多肽上。
2. 熒光標記
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物,受到紫外光或藍紫光照射時,可激發成為激發態,當從激發態恢復基態時,發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。
熒光標記由于沒有放射性,實驗操作簡單。因此,目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛,熒光標記方法與熒光試劑的結構有關系,對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。
在N端標記FITC的多肽需經歷環化作用來形成熒光素,通常會伴有最后一個氨基酸的去除,但當有一個間隔器如氨基己酸,或者是通過非酸性環境將目的肽從樹脂上切下來時,這種情況可避免。三羊開肽具有多種成熟的熒光標記多肽技術,優良的純化生產工藝。
3. 生物素標記
3.70年代后期,免疫學中應用了生物素-親合素系統 (biotin-avidin system,BAS),并得到迅速發展,成為了一種新型生物反應放大系統。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應,并與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術能夠有機地結合,使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。主要應用于標記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP),其中相對最為常用的是BNHS,當然,也可以直接使用生物素標記,因為其結構上有個游離的羧基,所以在縮合時采用HBTU/HOBt/DIEA的方法。由于生物素的溶解度很低,可以使用DMSO/DMF的混合溶劑來增加溶解度。
4. 磷酸肽合成
在生命過程中,磷酸肽發揮了重要的作用,如DNA損傷修復、轉錄調節、信號轉導、細胞凋亡的調節等。磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser,Thr,Tyr殘基的側鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。目前為止,多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化;單體法則是將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,這種方法較后磷酸化法操作更為簡便,已經成為多肽磷酸化修飾的主要方法。
單體法修飾時,磷酸化的氨基酸由于側鏈修飾的較大基團產生的位阻而導致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會比較困難,尤其在含有多個磷酸化位點修飾時,合成將變得異常困難,并且最終產物成分復雜,難以分離,產率極低。因此,當肽鏈中多個位點進行磷酸化時,可以考慮采用后磷酸化法,其合成過程主要就是在多肽合成結束之后,選擇性的脫去要標記氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應,而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化,采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,隨后在過氧酸下氧化生成磷酰基,完成反應。